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鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì)，占1150克。其中99％的鈣以氟磷灰石鈣（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細(xì)胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式：一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣，其構(gòu)成約40％至50％的血清中的總鈣含量；另一種為彌散型游離鈣，其進一步分成具有活性的復(fù)合鈣（complexed calcium）和離子鈣（ionized calcium）。鈣對神經(jīng)肌肉興奮性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)、信使傳導(dǎo)等方面起著重要作用。鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等，但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾，或者受限于儀器的特殊的要求。甲基百里酚藍(lán)（methylthymol blue；MTB）比色法是一種穩(wěn)定、簡便、準(zhǔn)確、直接的鈣檢測。鈣與甲基百里酚藍(lán)，在堿性條件下反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化（波長612nm），來定量測定鈣的總濃度。其反應(yīng)系統(tǒng)為：
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）     毫升
HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent B）     毫升
HEPENGBIO陰性液（Reagent C）     毫升
HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）     微升
產(chǎn)品說明書     1份
 
保存方式
 
保存在4℃冰箱里，避免光照，有效保證6月
 
用戶自備
 
1.5毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測樣品操作的容器
5毫升玻璃管：用于尿液樣品制備的容器
微型臺式離心機：用于樣品制備
培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育
比色皿：用于反應(yīng)的容器
分光光度儀：用于比色分析
 
實驗步驟
 
一、 樣品準(zhǔn)備
 
選擇一：血清樣品
1． 準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲存管 
2． 抽取1毫升血液，置于儲存管里
3． 室溫下，靜置30分鐘，直至血液凝結(jié)（注意：血液凝集后，不宜久置）
4． 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
6． 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存
 
選擇二：尿液樣品 
1． 準(zhǔn)備好5毫升玻璃管
2． 移取1毫升液體到玻璃管 
3． 調(diào)節(jié)pH到3至4（注意：使用0.1摩爾鹽酸調(diào)節(jié)）
4． 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上清液到新的5毫升玻璃管 
6． 加入2倍容量的用戶自備的無離子水
7． 即刻置于冰槽里備用 
 
二、 測定準(zhǔn)備
 
1． 準(zhǔn)備好上述制備的待測樣品，置于冰槽里備用
2． 設(shè)定好分光光度儀：波長612nm，并置零 
3． 準(zhǔn)備好5個1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號管
4． 分別加入xx微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）到2至5號管
5． 移取xx微升HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到1號管，混勻
6． 小心移取xx微升1號管的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到2號管，混勻
7． 小心移取xx微升2號管稀釋的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到3號管，混勻
8． 小心移取xx微升3號管稀釋的HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）到4號管，混勻
9． 將1至5號管放進冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表
 

管號	HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）	HEPENGBIO標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）	標(biāo)準(zhǔn)鈣濃度
1	--	xx微升	x毫摩爾/升
2	xx微升	xx微升1號管	xx毫摩爾/升
3	xx微升	xx微升2號管	xx毫摩爾/升
4	xx微升	xx微升3號管	xx毫摩爾/升
5	xx微升	0	0

 
 
三、（選擇步驟）背景對照測定
 
1． 移取xx微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent B）
3． 加入xx微升HEPENGBIO陰性液（Reagent C）  
4． 上下傾倒數(shù)次，混勻
5． 放進37℃培養(yǎng)箱里孵育5分鐘，避免光照
6． 即刻放進分光光度儀（612nm波長）檢測：獲得吸光讀數(shù)（OD）
 
四、 標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測樣品測定
 
1． 移取xx微升HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
2． 加入xx微升HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent B）
3． 加入20微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液或待測樣品 
4． 上下傾倒數(shù)次，混勻
5． 放進37℃培養(yǎng)箱里孵育5分鐘，避免光照
6． 即刻放進分光光度儀（612nm波長）檢測：獲得吸光讀數(shù)（OD）
7． 實際吸光讀數(shù)：標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測樣品吸光讀數(shù)－背景對照吸光讀數(shù)
8． 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為實際吸光讀數(shù)（OD）；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)鈣濃度（毫摩爾/升）
9． 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)鈣濃度
10． 計算樣品實際鈣濃度（注意：計算時，不要遺忘稀釋倍數(shù)；例如尿液樣品需要乘上3）
 
【根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)鈣濃度（毫摩爾/升）X 樣品稀釋倍數(shù)】＝毫摩爾/升
 
注意事項
 
1． 本產(chǎn)品為50次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)液
2． 操作時，須戴手套
3． 檢測過程中，尤其在標(biāo)準(zhǔn)曲線測定過程中，先將所需的HEPENGBIO緩沖液（Reagent A）和HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent B）全部混合后，再移取1毫升工作液進行測定操作，避免操作誤差
4． 避免使用EDTA、溴磺酚酞（bromosulfophthalein）、膽紅素（Bilirubin）、對乙酰氨基（acetaminophen）、肼屈嗪（Hydralazine）等，否則干擾檢測
5． 建議使用空腹后采集的無溶血現(xiàn)象的血清樣品
6． 陳舊血清，尤其出現(xiàn)沉淀的血清，不宜使用
7． 血清鈣在室溫下，24小時內(nèi)成分穩(wěn)定；4℃條件下，可維持1周；－20℃條件下，可維持5月
8． 系統(tǒng)操作過程中，標(biāo)準(zhǔn)液測定只需1次
9． 孵育反應(yīng)完成后即刻進行比色測定
10． 比色測定后，比色皿須清洗徹底
11． 如果用戶沒有匹配的濾波器，可以使用600nm至650nm之間的任一波長
12． 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
13． 檢測敏感度在5微摩爾至4毫摩爾鈣濃度范圍
14． 正常血鈣和尿鈣濃度：小于4周新生兒：7.2至11.2毫克/分升；2月至12月嬰兒：8.4至10.8毫克/分升；大于1歲：8.4至10.4毫克/分升；成人：8.6至10.2毫克/分升；尿鈣24小時總量100至320毫克
15． 換算：1毫摩爾/升 X  4.01 ＝ 毫克/分升；1毫克/分升＝250微摩爾/升
本公司提供系列鈣生化檢測試劑產(chǎn)品