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作為細(xì)胞染色劑之一的二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍(lán)（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），簡(jiǎn)稱噻唑鹽染料，可以自由地進(jìn)入活細(xì)胞中。細(xì)胞繁殖快，其代謝旺盛，線粒體琥珀酸脫氫酶的活性增強(qiáng)，從而還原細(xì)胞漿中的淡黃色外源性染料為不溶性、藍(lán)紫色結(jié)晶產(chǎn)物而留存在細(xì)胞內(nèi)，使用特定有機(jī)化物質(zhì)溶解結(jié)晶顆粒而呈現(xiàn)出顏色深淺，在570nm波長(zhǎng)下產(chǎn)生吸收峰：吸光值與細(xì)胞量成線性正相關(guān)，反映細(xì)胞活力。
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO染色液（Reagent A）    毫升
HEPENGBIO溶解液（Reagent B）    毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書                        1份
 
保存方式
 
保存在－20℃冰箱里，避免光照，有效保證6月
 
用戶自備
 
酶標(biāo)儀：用于定量檢測(cè)染色細(xì)胞
移液排槍：用于同步加入染色試劑
 
實(shí)驗(yàn)步驟
 
實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒放在室溫下融化,置于暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
 
一、貼壁細(xì)胞檢測(cè)
1． 從細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測(cè)的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板
2． 確保96孔板中每一個(gè)孔含有100微升細(xì)胞培養(yǎng)液
3． 小心加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent A）到96孔板中每一個(gè)孔里
4． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育2小時(shí)（可見紫色結(jié)晶沉淀）
5． 小心抽去每孔中含有HEPENGBIO染色液（Reagent A）的培養(yǎng)液（注意：確保培養(yǎng)孔中無(wú)任何液體殘留）
6． 小心加入xx微升HEPENGBIO溶解液（Reagent B）到96孔板中每一個(gè)孔里
7． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘
8． 輕輕搖動(dòng)96孔板，使其混勻
9． 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測(cè)讀：波長(zhǎng)570nm
10． 繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)
 
一、 懸浮細(xì)胞檢測(cè)
1． 從細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測(cè)的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板
2． 確保96孔板中每一個(gè)孔含有100微升細(xì)胞培養(yǎng)液
3． 小心加入xx微升HEPENGBIO染色液（Reagent A）到96孔板中每一個(gè)孔里
4． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育4小時(shí)（可見紫色結(jié)晶沉淀）
5． 放進(jìn)孔板離心機(jī)離心10分鐘，速度為300g
6． 小心抽去每孔中含有HEPENGBIO染色液（Reagent A）的培養(yǎng)液（注意：確保培養(yǎng)孔中無(wú)任何液體殘留）
7． 小心加入xx微升HEPENGBIO溶解液（Reagent B）到96孔板中每一個(gè)孔里
8． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱里，孵育1小時(shí)
9． 輕輕搖動(dòng)96孔板，使其混勻
10． 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測(cè)讀：波長(zhǎng)570nm
11． 繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標(biāo)（X軸）為細(xì)胞數(shù)